مقدمه
در حال حاضر ايران با توجه به تولید گسترده، بیش از ۸۸/۸درصد تولید جهانی زعفران را به عهده
دارد و به عنوان بزرگ ترين توليدكننده و صادركننده زعفران در جهان به شمار می آید .
درصد وزني اجزاي تشکيل دهنده گل تازه ۸۶/۴۲ درصد گلبرگ و کاسبرگ، ۵/۹۳۵ درصد پرچم و ۷/۶۴۵ درصد کلاله و خامه است که طی جداسازی کلاله از گل زعفران، کلاله از سایر اجزا جدا شده خشک و به بازارهای داخلی و خارجی ارسال می گردد اما باقیمانده گل زعفران شامل کاسبرگ، گلبرگ، خامه و پرچم زعفران محصوالت جانبي توليد زعفران هستند که در
حدود ۱۳۱۰۰۰ تن کاسبرگ و گلبرگ، حدود ۹۸۰۰ تن پرچم حاصل می گردد. این مواد اگرچه حاوي
مقادیر قابل ملاحظه اي ترکیبات با ارزش می باشند اما در حال حاضر بالاستفاده بوده و تنها به مصرف
خوراک دام می رسند یا در محیط زیست رها می شوند.
چنانچه بتوان از این ضایعات محصولات جانبی با ارزش افزوده از جمله انواع رنگ های خوراکی طبیعی و یا ترکیبات نگهدارنده تهیه نمود، علاوه بر جلوگیری از آلودگی محیط زیست، مواد تولید شده دارای ارزش افزوده بالاتری خواهند بود.
یکی از خصوصیات کیفی موادغذایی رنگ است که امروزه نقش مهمی در مقبولیت محصوالت غذایی
دارد. چنانچه محصول غذایی از رنگ مناسبی برخوردار نباشد با کاهش شدید تقاضا مواجه خواهند شد.
سایر خصوصیات کیفی مانند عطر، طعم، بافت و غیره پارامترهایی هستند که پس از مصرف محصول غذایی
ً پس از یکبار خریدن و مصرف کردن آن مورد قضاوت قرار می گیرند .
با توجه به کاربرد گسترده رنگ ها در مواد غذايي و گزارش هايي از مضرات و خطرات انواع شيميايي
رنگ هاي خوراكي، استخراج و خالص سازي عصاره های رنگي از منابع طبيعي ارزان قيمت، مورد توجه
قرار گرفته است. در راستای اين هدف در این مقاله روش های توليد رنگ طبیعی و ترکیبات دارای
خاصیت آنتی اکسیدانی از ضایعات گل زعفران طی مراحل ذیل مورد بررسی قرار گرفته است.
1 -تهیه اجزای گل زعفران:
در ابتدا مقدار لازم ضایعات گل زعفران )بقایای گل زعفران پس از جدا شدن کلاله یا اصطللاحا
پرکردن( تهیه و بخش های مختلف پرچم، خامه و گلبرگ )شکل1 )از یکدیگر جدا شدند و به طور
جداگانه با استفاده از آون در دمای 50 درجه سلسیوس خشک شدند. ضایعات گل زعفران الف) پرچم ب)خامه ج) گلبرگ (شکل1 )خشک شده با استفاده از دستگاه آسیاب به پودر تبدیل و در بسته های نایلونی به منظور جلوگیری از نفوذ رطوبت، بسته بندی و در محل تاریک و خنک نگهداری شدند.
۲ -استخراج عصاره های رنگی از اجزای گل :
ضایعات گل زعفران حاوی رنگدانه های محلول و نامحلول در چربی هستند لذا با استفاده از حالل
مناسب می توان این دو نوع رنگدانه را جدا نمود.
استخراج آنتوسیانین ها استخراج ترکیبات آنتوسیانینی موجود در گلبرگ، خامه و پرچم گل زعفران با استفاده از حلال )اتانول
اسیدی( انجام شد. نمونه پودر شده و حلال به نسبت 1 به 50 با هم مخلوط شدند .حلال اتانول اسیدی از مخلوط اتانول 70 و اسیدکلریدریک 5/1 نرمال به نسبت 85 به 15 سی سی
بدست آمد. مخلوط به مدت 15 دقیقه با همزن مغناطیسی در دمای محیط هم زده شد. سپس با استفاده از کاغذ صافی واتمن شماره 1 و با پمپ خلع صاف شد (شکل2 .).
رسوب حاصله تحت همان شرایط دوباره عصاره گیری شد. با قرار دادن عصاره در دمای 50 تا 55 درجه سلسیوس حلال حذف شد. همچنین به منظور حذف حلال و به حداقل رساندن آسیب به مواد موثره از دستگاه تبخیرکننده دوار در دمای 40 درجه سانتي گراد تحت خلع استفاده شد. پس از اینکه عصاره کامل خشک شد در ظروف شيشه اي تيره رنگ در یخچال نگهداري شدند.
برای استخراج کاروتنوئیدهای محلول در چربی از حلال های غیر قطبی استفاده شد. برای استخراج
رنگ از مخلوط سه حلال هگزان نرمال، پترولیوم اتر یا مخلوط حلال های هگزان نرمال، استون، اتانل
به نسبت 1:1:2 به نسبت 1:10 نمونه به حلال، استفاده شد.استخراج به مدت 2 ساعت و در دمای محیط همراه با همزدن در تاریکی انجام شد. نمونه ها توسط کاغذ صافی واتمن شماره 1 صاف شدند، سپس به آنها به مقدار 20 درصد حجم حلال مورد استفاده آب مقطر دیونیزه اضافه و نمونه ها به دو فاز آلی و آبی تقسیم شدند. فاز بالایی فاز غیرقطبی و حاوی کاروتنوئیدهای محلول در چربی و فاز پائینی فاز آبی حاوی کاروتنوئیدهای محلول در آب بود. حلال های کاروتنوئید ها توسط جریان هوا و یا توسط دستگاه تبخیر گردان تحت خلع در دمای 40 درجه سلسیوس حذف شدندو عصاره حاصله در ظروف تیره رنگ در مکانی سرد و خشک نگهداری شد .
3 -استخراج آنتی اکسیدان های طبیعی:
به منظور استخراج آنتی اکسیدان های طبیعی از روش استخراج با حلال استفاده شد. به این منظور،
نمونه با اتانول 80 درصد به نسبت چهار برابر وزن نمونه به مدت 48 ساعت همزده شد. پس از 24 ساعت اول مخلوط صاف شده و روی صافی مجددا اتانول اضافه شد و همزدن تا 24 ساعت دیگر ادامه یافت. زیر صافی ها با یکدیگر مخلوط شده و حلال با استفاده از دستگاه تبخیر گردان و آون تحت خلع حذف و عصاره حاصل در ظروف تیره رنگ در مکانی سرد و خشک نگهداری شدند .
1 -محاسبه بازده استخراج:
راندمان استحصال زعفران از تقسیم وزن کلاله های خشک شده زعفران بر وزن کلاله های تر(مرطوب) اولیه ضرب در 100 بدست آمد.
از تقسیم وزن عصاره خشک بر وزن ماده اولیه مقدار کل ماده خشک عصاره استخراج شده محاسبه و
به صورت درصد بیان شد .
2 -اندازه گیری میزان ترکیبات آنتوسیانینی کل:
اندازه گیری آنتوسیانین به روش pH افتراقی مطابق روش گیستی و رالستاد، انجام گرفت. به این
منظور از دو بافر با HP یک (kcl-HCL) و
۴/۵( استات سدیم) استفاده شد. نمونه با بافرها به حجم رسیدند سپس در دو طول موج520 و700نانومتر میزان جذب را یکبار با بافر 1 و بار دیگر با بافر 2 قرائت شدند.
5 -اندازه گیری میزان ترکیبات کاروتنوئیدی کل:
نمونه های خشک شده ابتدا به نسبت 1 به 20 رقیق شد، سپس طیف جذبی آنها توسط اسپکتروفتومتر در محدوده طول موج 350 تا 500 نانومترتهیه و در طول موج ماکزیمم جذب، میزان جذب هر یک از نمونه ها قرائت شد.
نتیجه گیری کلی:
شکل 1 راندمان استخراج و میزان آنتوسیانینهای کل موجود در ضایعات زعفران را نشان می دهد.
جدول 1 مقدار ترکیبات رنگی و آنتی اکسیدانی موجود در ضایعات گل زعفران را نشان میدهد.
جدول1 :راندمان استخراج، مقدار ترکیبات رنگی و آنتی اکسیدانی موجود در ضایعات گل زعفران
شکل 1 و جدول 1 نشان می دهد راندمان استخراج عصاره از ضایعات گل زعفران در حدود 37
تا 48 درصد ماده خشک بود (جدول1 )و در بین ضایعات گل زعفران، گلبرگ با ۴۸/۸درصد دارای
بیشترین راندمان استخراج بود.
جدول 1 نشان میدهد آنتوسیانین های موجود در ضایعات گل زعفران، در حدود ۱۵/۱۷ تا ۹۹۸/۵ میلی
گرم در هر لیتر می باشد بیشترین مقدار آن در گلبرگ)۹۹۸/۵ میلی گرم در لیتر و کمترین مقدار آن در خامه گل زعفران ۱۵/۱۷ میلیگرم در لیتر می باشد. آنتوسیانین ها بزرگترین گروه رنگدانه های محلول در آب در قلمرو گیاهان هستند و به دسته ای از مولکول ها به نام فالونوئیدها تعلق دارند. بهترین منابع آنتوسیانین ها عبارتند از خانواده توت ها مانند :بلوبری- کرانبری- بلکبری- تمشک و گیاهانی نظیر:
انگور موسکادین- کلم قرمز-برنج سیاه-پوست بادمجان. آن ها مسئول ایجاد رنگ در بسیاری از گل ها، میوه ها و بری ها هستند و می توانند به عنوان رنگ های طبیعی در سیستم های غذایی مورد استفاده قرار گیرند. مقدار آنتوسیانین ها در این مواد در حدود 50 تا میلی گرم در لیتر1200 است. مقدار این ماده در گلبرگ زعفران با بسیاری از منابع یاد شده قابل رقابت بوده لذا گلبرگ زعفران
منبعی ارزان قیمت و فراوان ازاین ماده ارزشمند محسوب می گردد.
ضایعات گل زعفران حاوی مقادیر نسبتا بالایی از انواع کاروتنوئیدهای محلول در آب و چربی نیز
می باشند (جدول1 .)کاروتنوئیدها دسته ای از رنگدانه ها به رنگ های زرد، نارنجی و قرمز هستند که در جذب نور در گیاهان نقش بسیار مهمی دارند. از کاروتنوئیدهای مشهور میتوان به بتاکاروتن، آلفا کاروتن،
لیکوپن، لوتئین و گزانتوفیل اشاره کرد که اغلب آن ها محلول در چربی هستند و کروسین (رنگدانه
زعفران) تنها کاروتنوئید محلول در آب می باشد جدول 1 نشان میدهد ضایعات گل زعفران حاوی این رنگدانه نیز میباشند. در میان ضایعات گل زعفران گلبرگ زعفران با ۵۱/۷ میلی گرم بر لیتر حاوی بیشترین مقدار کاروتنوئیدهای محلول در آب بود و پس از آن پرچم گل زعفران در مقایسه با خامه گل زعفران مقدار بیشتری از این ماده را دارا بود (جدول1 .)اما از میان ضایعات گل زعفران، پرچم گل زعفران با۳/۶ میلی گرم در لیتر تنها منبع کاروتنوئیدهای محلول در چربی می باشد.
جدول 1 نشان میدهد مقدار IC50 گلبرگ زعفران کمترین مقدار بود و این موضوع نشانگر بیشتر بودن قدرت آنتی اکسیدانی آن می باشد. هر چه میزان IC50 کمتر باشد اثر آنتی اکسیدانی بیشتر اسـت زیرا قدرت مهار اکسایش را با غلظت کمتري انجام می دهد. از آنجایی که میزان آنتوسیانین ها در گلبرگ زعفران زیاد است لذا بالاتر بودن قدرت آنتی اکسیدانی آن توجیه می گردد زیرا ارتباط مستقیمی بین میزان آنتوسیانین ها و قدرت آنتی اکسیدانی وجود دارد (رایس ایوند و همکاران، 1996 ،ملترم و همکاران، 2013 .)
ضایعات گل زعفران بواسطه داشتن مقادیر زیادی از ترکیبات آنتوسیانینی، کاروتنوئیدی و فنلی
دارای مواد رنگی طبیعی و ترکیبات دارای قدرت آنتی اکسیدانی باالیی هستند که می توانند در مواد غذایی و دارویی به عنوان مواد رنگ دهنده یا آنتی اکسیدان های طبیعی کاربرد گسترده ای داشته باشند. و باتوجه به غنی بودن پوشش گیاهی شمال شرق کشور و با در نظر گرفتن اثرات نامطلوب آنتی اکسیدان های سنتزی و رنگ های سنتیک و با در نظر گرفتن خواص دارویی و مغذی متعدد گرده، می توان زمینه استفاده از آن را به عنوان یک منبع رنگی و آنتی اکسیدانی جدید در صنایع غذایی و دارویی فراهم نمود.